Dažādu sēņu ekstraktu ietekmes uz ādas struktūrproteīnu ekspresiju novērtēšana MCŠ kultūrās

Abstract

Darba mērķis bija novērtēt dažādu sēņu ekstraktu iedarbību uz cilvēka ādas mezenhimālo cilmes šūnu kultūrām struktūrproteīnus kodējošo gēnu ekspresijas līmenī. Darbā tika izmantotas piecas no cilvēka ādas izdalītas mezenhimālās cilmes šūnu kultūras. Šūnas tika kultivētas barotnēs ar sēņu ekstraktu piedevām (L.edodes ar polisaharīdu daudzumiem 1,56 mg/ml un 40,16 mg/ml un G.lucidum 1 mg/ml) atšķirīgās koncentrācijās (0,25%, 0,5% un 1%). Pēc šūnu morfoloģijas novērtēšanas tām tika veikta RT-qPCR ādas struktūrproteīnus kodējošo gēnu has1, col1A, col3 un eln ekspresijas novērtēšanai. Kā references gēns tika izmantots pastāvīgi ekspresētais β-actin. Ādas MCŠ morfoloģija un gēnu col1A un eln ekspresija sēņu ekstraktu ietekmē nemainījās. Visi trīs ekstrakti pozitīvi ietekmē has1 gēna ekspresiju, bet vispozitīvākā ietekme uz col3 gēna ekspresiju ir novērojama abiem L.edodes ekstraktiem. Kopumā vislabvēlīgākais efekts uz ādas struktūrproteīnu gēnu ekspresiju ir L.edodes 1,56 mg/ml ekstraktam.

The aim of the work was to evaluate the effects of different fungal extract influence on expression of structural skin proteins coding genes in human skin mesenchymal stem cell cultures. Five from human skin derived mesenchymal stem cell cultures were used. The cells were cultured in media with fungal extract additives (L.edodes with polysaccharide concentrations 1,56 mg/ml and 40,16 mg/ml, and G.lucidum 1 mg/ml) in different concentrations (0,25%, 0,5%, and 1%). After assessment of morphology RT-qPCR was done to evaluate the expression of structural skin proteins coding genes has1, col1A, col3, and eln. Housekeeping gene β-actin was used as reference. Fungal extracts do not affect skin MCS morphology or col1A and eln gene expression. All three extracts have a positive effect on has1 gene expression, but both L.edodes extracts showed the most positive effect on col3 gene expression. L.edodes 1,56 mg/ml extract shows the most beneficial effect on skin structural protein expression.