MRNS iepakošana in vivo no bakteriofāga GS atvasinātās vīrusiem līdzīgās daļiņās
Author
Ārgule, Dagnija
Co-author
Latvijas Universitāte. Bioloģijas fakultāte
Advisor
Tārs, Kaspars
Date
2013Metadata
Show full item recordAbstract
Šajā maģistra darbā ir parādīta zaļā fluorescentā proteīna (GFP) mRNS iepakošana in vivo Saccharomyces cerevisiae/pESC-URA ekspresijas sistēmā natīvās bakteriofāga GA apvalka proteīna veidotās vīrusiem līdzīgās daļiņās (VLD) un daļiņās, kurās apzināti ieviestas aminoskābju mutācijas. Tika pārbaudīta VLD veidošanās, apvalka proteīnā ieviešot aminoskābju mutācijas R43→N; K55→N vai S87→N un dubultmutācijas K55→N un S87→N vai S87→N un R43→N, un salīdzināts VLD ieguvums. VLD tika noteikta totālā RNS pakošanas kapacitāte un mRNS procentuālā daļa no tās. No VLD izdalītajās mRNS tika pierādītas GFP sekvence. Konstrukcijā, kurā aiz GFP gēna tika ievietota bakteriofāga MS2 operatora sekvence, tika pierādīts, ka VLD šāda mRNS tiek iepakota efektīvāk nekā gadījumos bez MS2 operatora sekvences.
Atslēgvārdi: VLD, iepakošana in vivo, bakteriofāgs GA, GFP. In this work is shown green fluorescent protein (GFP) mRNA packaging in vivo into bacteriophage GA derived native virus-like particles (VLP) and VLP’s with amino acid sequence mutations by using commercial plasmid pESC-URA in yeast Saccharomyces cerevisiae. VLP’s formation were tested and VLP’s yield were compared in cases, when in coat protein sequence were introduced single amino acid mutations – R43→N; K55→N or S87→N – and double mutations – K55→N and S87→N or S87→N and R43→N. For VLP’s were defined total RNA packaging capacity and mRNA percentage of total RNA. In fraction of packaged mRNA GFP sequence was detected in all cases. In case of construction where sequence of bacteriophage MS2 translation operator was put after gene of GFP, was proven that mRNA are packaged efficiently into VLP’s than in cases without MS2 operator sequence.
Key words: VLP, packaging in vivo, bacteriophage GA, GFP.