Doksorubicīna un 5-Flioruracila pretvēža darbības aktivitātes noteikšana kombinācijā ar onkolītiskiem alfavīrusu vektoriem

Abstract

Onkolītiskā viroterapija ir daudzsološa gēnu terapijas forma vēža ārstēšanā. Šajā darbā tika pētīts onkolītiskā alfavīrusu pārstāvja Semliki meža vīrusa potenciāls vēža terapijā. Tā kā Semliki meža vīrusam nav izstrādāts specifisks pielietojums peļu melanomas audzēja šūnās B16-F10, alfavīrusa iedarbība tika pētīta šajā šūnu kultūrā. Šī darba mērķis bija pārbaudīt uz Semliki meža vīrusa (SFV) replikona pamata izveidota rekombinanta alfavīrusa vektora rekSFV1/dsRed terapeitisko iedarbību peļu melanomas šūnu līnijā B16-F10 in vitro kombinācijā ar 5Fu (5-fluoruracils) un DOX (doksorubicīns) ķīmijpreparātiem. Tika iegūts rekSFV1/dsRed vīruss ar augstu vīrusa daļiņu titru. Tika mikroskopiski pierādīta rekSFV spēja replicēties B16-F10 šūnās pēc to elektroporācijas ar rekSFV1/dsRed RNS, bet parādīta samazināta rekSFV inficētspēja B16-F10 šūnās. Tika pārbaudīta šūnu proliferācija, izmantojot MTT metodi piecu dienu garumā pēc rekSFV kombinētas iedarbības uz B16-F10 šūnām ar dažādu koncentrāciju ķīmijpreparātiem DOX un 5Fu, lai noteiktu kombinācijterapijas citopātisko efektu. RekSFV sinerģija ar ķīmijpreparātiem bija novērojama abos gadījumos. RekSFV kombinācijā ar DOX uzrādīja zemu citopātiskā efekta potenciālu, bet augstu B16-F10 šūnu inficētspēju. Kombinācijā ar 5Fu rekSFV uzrādīja augstu citopātiskā efekta potenciālu, bet zemu inficētspēju B16-F10 šūnās. Lai pārliecinātos par transdukcijas efektivitāti B16-F10 šūnās pēc to apstrādes ar ķīmijpreparātiem, tika veikta FACS analīze. Secinājām, ka rekSFV ir augsts citopātiskais potenciāls peļu melanomas šūnās, bet nepieciešama specifiskas stratēģijas izveide rekSFV vektora izmantojumam B16-F10 šūnu kultūrā.

Atslēgas vārdi: onkolītiski vīrusi, rekSFV vektors, ķīmijterapija, pretvēža terapija.

Oncolytic virotherapy is a promising strategy of gene therapy in curing cancer. In this study the potential of oncolytic alphavirus representative Semliki Forest virus (SFV) was studied. There is not any specific applications for Semliki Forest virus in B16-F10 cells. The aim of this study was to examine the therapeutic application of alphavirus vector SFV1/dsRed that has been created on the base of Semliki forest virus replicon, on mouse melanoma B16-F10 cell line in vitro in combination with chemotherapeutical agents 5Fu (5-fluorouracil) and DOX (doxorubicin). RekSFV1/dsRed with high titre was obtained. It was proved that RNA of rekSFV1/dsRed is asble to replicate in B16-F10 cells after electroporation but rekSFV infectivity in B16-F10 cells was low. MTT method was used for five days to determine cell proliferation after combined application of rekSFV and chemotherapeutic agents DOX and 5Fu on B16-F10 cells. In this way it was possible to detect the cytophatic effect of combined therapy. Synergism between both chemotherapeutic agents and rekSFV was observed. RekSFV showed low potential cytopatic effect in combination with DOX, as well as high infectivity in B16-F10 cells. High potential cytophatic effect was shown after combined therapy with 5Fu and rekSFV but virus infectivity in this case was low. In order to determine the effectivity of transduction in B16-F10 cells after treatment with chemotherapeutics, FACS analysis was carried out. We concluded that rekSFV is of a high cytophatic potential but new strategic applications for the use of rekSFV in B16-F10 cell culture are needed.

Key words: oncolytic viruses, recSFV vectors, chemotherapy, cancer therapy.