Adreses nesošu vīrusiem līdzīgo daļiņu mijiedarbība ar eikariotu šūnām

Abstract

Šī darba mērķis bija pētīt ar preS1 sekvences fragmentiem dekorēto AP 205 bakteriofāga apvalka proteīna un hepatīta B vīrusa core proteīna veidoto vīrusiem līdzīgo daļiņu (VLD) mijiedarbību ar dažādu eikariotu šūnu līnijām –HepG2, Hek293, Jurkat, Namalva un BHK. Tika izstrādātas metodes VLD iezīmēšanai ar fluorescento iezīmi un to saistības pētīšanai ar eikariotu šūnām, izmantojot fluorimetrijas, šūnu citometrijas, fluorescences mikroskopijas un lāzerskenējošās konfokālās mikroskopijas metodes. Varēja secināt, ka no HBV core proteīna atvasināto VLD mijiedarbības rezultātu ietekmē DNS saistošais domēns. Savukārt uz VLD virsmas eksponēti preS1 sekvences fragmenti pētītajās konstrukcijās nenodrošina pārliecinoši augstāku mijiedarbību ar šūnām, taču visgarākā preS1 fragmenta klātbūtne VLD sastāvā nodrošināja daļiņu internalizāciju šūnās. Šis darbs tika izstrādāts Latvijas Biomedicīnas petījumu un studiju centrā laikā no 2010. gada septembra līdz 2011. gada maijam. Atslēgas vārdi: bakteriofāgs AP 205, hepatīta B vīruss, vīrusiem līdzīgās daļiņas, preS1 sekvence, piegādāšana uz šūnām.

The aim of this work was to study AP205 bacteriophage coat protein and hepatitis B virus core protein virus-like particles, decorated with preS1 sequence fragments, interaction with different eukaryotic cell lines: HepG2, Hek293, Jurkat, Namalva and BHK. There were developed methods for labeling virus-like particles with FITC label and studying their interaction with eukaryotic cell lines, using fluorimetry, cell cytometry, fluorescent microscopy, confocal laser-scanning microscopy and immunofluorescence methods. It was concluded that HBV core protein DNA-binding domain is essential for VLP interaction with cells. It was also concluded that decorating AP 205 phage coat protein VLP with preS1 sequence fragments does not statistically significantly improve the ability of VLP to interact with cells, but the presence of the longest preS1 sequence fragment mediate VLP internalisation into cells. The work was performed in Latvian Biomedical Research and Study Centre from September 2010 to May 2011. Key words: bacteriophage AP205, virus-like particles, preS1 sequence, delivery to cells.