Penicillium lanoso-viride AMP dezamināzes attīrīšanas preparatīvo metožu izstrāde

Abstract

AMP dezamināze ir glikoproteīns, kam piemīt imūnmodulējošas īpašības, tādēļ darba mērķis bija izstrādāt efektīvu un ātru AMPD attīrīšanas metodi no Penicillium lanoso–viride 8D, ar kuras palīdzību būtu iespējams iegūt proteīna preparātu ar pietiekami augstu AMPD aktivitāti. Izmantojot divfāžu frakcionēšanu ar PEG un amonija sulfātu, kam seko proteīnu precipitācija ar acetonu, tika atdalīts pigments un iegūts ekstrakts ar līdzīgu AMPD specifisko aktivitāti un lielāku aktivitātes iznākumu, kāds tiek iegūts, izmantojot proteīnu precipitāciju ar amonija sulfātu – līdz šim izmantoto metodi. AMPD attīrīšanai no koncentrētiem ekstraktiem tika izmantoti DEAE–Sephadex A–25, fosfoceluloze un konkanavalīna A sefaroze, tomēr ar to palīdzību neizdevās iegūt proteīnu preparātus ar augstu AMPD specifisko aktivitāti vai attīrīšanas pakāpi.

The aim of this study was to develop a relatively rapid method to purify AMP deaminase from Penicillium lanoso–viride 8D, as this glycoprotein is known to possess an immunomodulatory properties. Specific activity of AMP deaminase – 1,26 U/mg and enzyme recovery of 86,5% were obtained using polyethylene glycol and ammonium sulphate two-phase partioning system followed by acetone precipitation of proteins, turbidity of the extract was removed as well. Similar results, except for optical clarification, were acquired using ammonium sulphate precipitation – a method employed at present as a first step of AMPD purification. AMP deaminase was purified using batch chomatography on phosphocellulose and DEAE–Sephadex A–25, and chromatography on concanavalin A sepharose, however these methods did not lead to high purification fold of the enzyme.