Hitozāna pārklājuma ietekme uz ādas mezenhimālo cilmes šūnu fenotipu 3D šūnu kultūrā

Abstract

3D šūnu kultūras daudz precīzāk atspoguļo šūnu mijiedarbību in vivo, salīdzinot ar standarta 2D kultūrām. Hitozāns ir unikāls biomateriāls, kurš tiek izmantots 3D šūnu kultūru inducēšanai. Bakalaura darba mērķis bija analizēt hitozāna ietekmi uz 3D mezenhimālo cilmes šūnu (MCŠ) fenotipu. 3D kultūra tika inducēta, izmantojot hitozāna pārklājumu. MCŠ dzīvotspēja, virsmas marķieru CD73, CD90, CD105, nervu kores marķiera CD271, hematopoēzes marķieru CD34, CD45 un pluripotences marķieru SSEA-1, SSEA-4, Oct ¾ ekspresija tika analizēta ar plūsmas citometrijas metodi. MCŠ dzīvotspēja 2D un 3D kultūrā būtiski neatšķīrās. Pēc 72h kultivēšanas 3D, CD90 un CD73 ekspresija MCŠ nokritās par 43% un 54%. Hitozāns inducēja CD271 ekspresiju 2 % D6 MCŠ pēc 24h kultivēšanas 3D. SSEA-4 ekspresijas izmaiņas 3D kultūrā bija atkarīgas no izmantotās MCŠ kultūras.

3D cell culture reflects the interaction of cells in vivo more accurately as compared to standard 2D cultures. Chitosan is a unique biomaterial, which is used for 3D cell culture for induction. The aim of bachelor thesis was to analyze the effect of chitosan on 3D mesenchymal stem cell (MSC) phenotype. 3D culture was induced using chitosan coating. Viability of MSC, surface marker CD73, CD90, CD105, neural crest marker CD271, haematopoietic marker CD34, CD45 and pluripotences marker SSEA-1, SSEA-4, Oct ¾ expression was analyzed by flow cytometry. MSC viability in 2D and 3D culture did not differ significantly. After 72h cultivation in 3D, CD90 and CD73 expression in MSC decreased by 43% and 54% respectively. Chitosan induced the expression of CD271 in 2% of D6 MSC after 24h cultivation in 3D. In 3D culture SSEA-4 expression varied depending on the MSC culture.