Uz čipu balstītās multiplex digitālās PĶR kvantifikācijas metodes novērtējums un verifikācija ĢMO testēšanas jomā.

Abstract

Digitālā polimerāzes ķēdes reakcija (dPĶR) ir kvantitatīva metode, kas var tikt ieviesta ĢMO testēšanas jomā, konkrētos gadījumos, aizstājot kvantitatīvo rlPĶR. Šī darba mērķis ir dPĶR metodi verificēt veicot salīdzinošu pētījumu ar sertificētiem ĢMO standarta materiāliem (CRM), lai novērtētu uz nodalījumiem balstītas dPĶR (cdPĶR) metodes veiktspēju un piemērotību ikdienas ĢMO testēšanā BIOR laboratorijā. Darbā izmantoti CRM ĢM notikumiem MON40-3-2 un MON810, kā arī dzīvnieku barības un Latvijas tautsaimniecībā aktuāli produkti klasisko ĢMO ekspozīcijas novērtējumam. Darba ietvarā veikts ĢMO skrīnings, kvantifikācija ar rlPĶR un dPĶR un izpildīts verifikācijas process. Metodes verifikācijas procesā pierādīts, ka ar cdPĶR iegūtie standartmateriālu piemaisījumu rezultāti ir atbilstoši un lineāri pie dažādiem ĢM piemaisījuma daudzumiem.

Digital polymerase chain reaction (dPCR) is a quantitative method that can be introduced in the field of GMO testing, in instances replacing qPCR. The goal of this study is to verify dPCR method by conducting a comparative study with certified GMO standard materials (CRM) to evaluate and demonstrate the performance and suitability of chamber-based dPCR (cdPCR) in the routine testing of GMOs in the BIOR laboratory. The work includes CRM for GM events MON40-3-2 and MON810, as well as animal feed and topical products available to Latvian consumers for an assessment of GMO exposure. Within the framework of the work, GMO screening, quantification with qPCR and dPCR was performed and the process of verification was shown. During the process of verification, it is demonstrated that CRM results of different mass fractions are appropriate.