Hipofīzes adenomu ietekmējošo kandidātfaktoru funkcionālā raksturošana šūnu kultūrās

Abstract

Hipofīzes neiroendokrīnais audzējs (PitNET) ir labdabīgs smadzeņu audzējs, kas ir viens no visbiežāk sastopamajiem audzējiem smadzeņu dobumā. Molekulārie un šūnu mehānismi, kas veicina PitNET patoģenēzi, vēl nav labi izprasti. Somatostatīna receptoru analogi (SSA) tiek izmantoti audzēju ārstēšanai, tomēr daļai pacientu ir novērota rezistence pret SSA, kuru būtiski ietekmē dažādu gēnu ekspresija. Šajā darbā PitNET šūnu līnijās tika validēti un funkcionāli noraksturoti PitNET transkriptomu sekvencēšanā atklātie G-proteīna signalizācijas regulatora 4 (RGS4) un miR-625-5p kandidātfaktori un novērtēta SSA transkriptomiskā un funkcionālā ietekme uz somatotrofo GH3 šūnu līniju. Iegūtie rezultāti parādīja, ka RGS4 kā GTPāzi aktivizējošā proteīna inhibēšana pastiprinā SSA ietekmi uz PitNET šūnu proliferāciju un apoptozi modulējot cAMF un MAPK signālpārneses ceļus. Savukārt miR-625-5p izslēgšana GH3 šūnās palielina SSA antiproliferatīvo darbību. GH3 šūnu līnijas transkiptomā netika novērotas nozīmīgas izmaiņas pēc SSA stimulācijas, kas būtu pielīdzināmas no PitNET audiem iegūto sfēru transkriptoma izmaiņām, liecinot par to, ka GH3 šūnās pilnībā neatspoguļo PitNET sfērās notiekošos procesus.

Pituitary neuroendocrine tumor (PitNET) noncancerous brain tumor, that is one of the most common tumors in the brain cavity. The molecular and cellular mechanisms that contribute to the pathogenesis of PitNET are not yet well understood. Somatostatin receptor analogues (SSAs) are used to treat tumors, but resistance to SSA has been reported in some patients and is significantly affected by the expression of various genes. In this study, candidate proteins of the G-protein signaling regulator 4 (RGS4) and miR-625-5p detected by PitNET transcriptome sequencing were validated and functionally characterized in PitNET cell lines and the transcriptomic and functional effects of SSA on the somatotrophic GH3 cell line were evaluated. The results showed that inhibition of RGS4 as a GTPase activating protein potentiates the effect of SSA on PitNET cell proliferation and apoptosis by modulating cAMP and MAPK signaling pathways and knockdown of miR-625-5p in GH3 cells increases the antiproliferative activity of SSA. No significant changes were observed in the transcriptome of the GH3 cell line after SSA stimulation comparable to changes in the transcriptome of the PitNET-derived spheres, suggesting that GH3 cells do not fully reflect the processes in the PitNET spheres.