Ādas dzīšanu veicinoša Penicillium lanoso -viride glikoproteīna iedarbības uz augšanas faktoru sekrēciju in vitro testēšana

Abstract

Darba mērķis bija novērtēt imūnmodulējoša glikoproteīna AMP dezamināzes ietekmi uz angioģenēzi veicinošiem augšanas faktoriem brūču dzīšanā in vitro. Darbā izmantoja cilvēka dermas fibroblastus, HaCaT keratinocītus un endotēlija šūnas HUVEC. Šūnas kultivēja barotnēs ar pievienotu AMPD divās dažādās koncentrācijas. Vizuāli novērtēja šūnu skaita un morfoloģijas izmaiņas. Augšanas faktoru – FGF-7, VEGF, angiopoetīna-2, EGF, endoglīna, endotelīna-1, FGF-1, FGF-2, HB-EGF, HGF un IL-8 – sekrēcijas izmaiņas analizēja ar ELISA un Milliplex Map cilvēka ar angioģenēzi saistīto augšanas faktoru sekrēcijas analīzi. Ar RT-qPCR novērtēja ādas struktūrproteīnus kolagēnu I un elastīnu kodējošo gēnu, kā arī VEGF gēna ekspresijas izmaiņas AMPD ietekmē. AMPD lielākajā koncentrācijā novēroja citostatisku efektu uz cilvēka dermas fibroblastiem un HaCaT keratinocītiem. Uz endotēlija šūnām HUVEC inhibējošu ietekmi nenovēroja. Cilvēka dermas fibroblastos AMPD ietekmē samazinājās FGF-7 sekrēcija, bet ilgstoša šī glikoproteīna ietekme lielākajā koncentrācijā inducēja VEGF sekrēciju. HaCaT keratinocītos AMPD ietekmē samazinājās gan FGF-7, gan VEGF sekrēcija. HUVEC šūnās AMPD ietekmē kopumā samazinājās augšanas faktoru sekrēcija. Indikatīvie RT-qPCR rezultāti rādīja, ka cilvēka dermas fibroblastos AMPD ietekmē samazinājās kolagēna I gēna ekspresija, bet palielinājās elastīna gēna ekspresija.

The aim of the study was to evaluate the effect of immunomodulating glycoprotein AMP deaminase on angiogenesis-stimulating growth factors in wound healing in vitro. Human dermal fibroblasts, HUVECs and HaCaT keratinocytes were used. The cells were cultured in media with AMPD at two different concentrations. Changes in cell numbers and morphology were evaluated visually. Changes in such growth factors as FGF-7, VEGF, angiopoietin-2, EGF, endoglin, endothelin-1, FGF-1, FGF-2, HB-EGF, HGF and IL-8 were analysed with ELISA and Milliplex Map human angiogenesis/ growth factor magnetic bead panel. Changes in expression of genes encoding cutaneous structural proteins collagen I and elastin, as well as gene encoding VEGF in presence of AMPD, were evaluated using RT-qPCR. Cytostatic effect was observed in human dermal fibroblasts and HaCaT keratinocytes cultured in the highest concentration of AMPD. No inhibiting effect was observed in HUVECs. FGF-7 secretion decreased in human dermal fibroblasts cultured in media with added AMPD. VEGF secretion, however, was induced by the highest concentration of AMPD. AMPD caused decrease in both FGF-7 and VEGF secretion in HaCaT keratinocytes. It also caused decrease in growth factor secretion in HUVECs. Indicative RT-qPCR results showed suppresion of collagen I gene expression and increased expression of gene encoding elastin in human dermal fibroblasts cultured in media with added AMPD.