Monocītu - makrofāgu diferenciācijas noteikšana, izmantojot plūsmas citometrijas un mikroskopijas metodes

Abstract

Monocīti ir cilvēka organisma šūnas, kuras aktīvi reaģē uz vides izmaiņām. Noteiktos apstākļos, reaģējot uz vides stimulāciju, tie migrē uz iekaisuma vai bojājuma vietu organismā un atbilstoši maina funkcionālo fenotipu, diferencējoties par makrofāgiem. Zināms, ka monocīti var diferencēties par atšķirīgu tipu makrofāgiem. Klasiski tiek izdalīti divi polarizētu makrofāgu tipi: M1 makrofāgiem ir svarīga loma gan pie iedzimtās, gan pie adaptīvās imunitātes, bet M2 makrofāgi atbild par audu atjaunošanu un ir saistīti ar hroniskām infekcijas slimībām. Šī darba mērķis bija izstrādāt monocītu – makrofāgu diferenciācijas modeli, ko varētu izmantot bioloģiski aktīvu faktoru pētījumos. Šūnu morfoloģija tika novērota, izmantojot fāzu kontrasta gaismas mikroskopu un marķieru ekspresijas analīze tika veikta ar plūsmas citometrijas metodi. Pētījuma rezultāti liecina, ka monocītiem diferencējoties par makrofāgiem, mainās šūnas morfoloģija un fenotips, un katram apakštipam ir raksturīgas pazīmes, pēc kurām var raksturot izmaiņas šūnās.

Monocytes are cells of human body, that actively react at changes in surrounding substance. These cells can change functional phenotype and differentiate to macrophages reacting to surrounding substance stimulation and migrating to damaged or tumor zone. It is known that monocytes may differentiate to several types of macrophages. Classically, there are two polarized types of macrophages: M1 macrophages has an important role in an innate immunity and in adaptive immunity, and M2 macrophages has a role of tissue repair unit and are related to chronic infection diseases. The aim of this work was to make a model of differentiation between monocytes and macrophages, which could be used in biological active factor researches. The morphology of cells was observed using contrast light phase microscope and markers expressions were analyzed with flow cytometry method. The results of work shows that monocytes differentiating to macrophages change its morphology and phenotype, and each subtype has its characteristic marks, which can be used for identification of changes in cells.