Augsta riska cilvēka papilomas vīrusa detekcija nieres transplantāta recipientēm ar imūnsistēmas supresiju dinamikā

Abstract

Šī darba ietvaros ar dāžadām testēšanas metodēm detektēja augsta riska cilvēka papilomas vīrusa (HPV) klātbūtni nieres transplantāta recipienšu vidū, kā arī pētīja vīrusa slodzes un detektējamības izmaiņas periodā no 2 nedēļām līdz 1 gadam pēc transplantācijas. Pētījumā tika iesaistītas 35 nieres transplantāta recipientes un 79 praktiski veselas sievietes kā kontroles grupa. Pētījumā tika izmantotas dzemdes kakla iztriepes un perifērās asinis plazmas izdalīšanai. Iegūtos rezultātus salīdzināja ar kontroles grupu, lai spriestu par imūnsupresēto indivīdu paaugstināto risku HPV infekcijai. Dzemdes kakla iztriepju šūnu suspensijās gan recipienšu, gan kotroles grupas sievietēm HPV DNS sākotnēji detektēja izmantojot MY09/11 konsensus praimerus, augsta riska HPV DNS detekcijai un vīrusa slodzes noteikšanai izmantoja komerciālo komplektu HPV High Risk Screen Real-TM Quant (Sacace, Itālija) un tipēšanai izmantoja Anyplex™ II HPV28 Detection komerciālo komplektu (Seegene, Dienvidkoreja). Papildus HPV DNS detekcijai noteica augsta riska HPV L1 kapsīda antivielu klātbūtni ar ELISA un HPV 16/16 E6 un E7 onkogēnu ekspresiju (tikai recipienšu paraugos). Recipienšu un kontroles grupas rezultātus salīdzināja un statistiskos aprēķinus veica GraphPad Prism 6 programmā. HPV DNS klatbūtne recipienšu paraugos tika detektēta ievērojami biežāk nekā kontroles grupā - kotroles grupā 38 % (30/79), 2 nedēļas 66 % (23/35), 6 mēnešus 77 % (27/35) un 1 gadu pēc transplantācijas 69 % (24/35) (p < 0,05). Arī augsta riska HPV klātbūtne recipienšu grupā bija ievērojami augstāka – 2 nedēļas 31 % (11/35), p < 0.01, 6 mēnešus 40% (14/35), p < 0,0001 un 1 gadu pēc transplantācijas 40 % (14/35), p < 0.0001, bet kontroles grupā 8 % (6/79). Lai gan augstākā vīrusa slodzes (log kopijas/105 šūnām) mediāna tika detektēta 1 gadu pēc tranplantācijas, vairumam paraugu bija novērojama tendence 6 mēnešus pēc transplantācijas strauji paaugstināties vīrusa slodzei un 1 gada periodā slodzei atkal samazināties. Šī novērotā tendence sakrīt ar imūnsistēmu supresējošo preperātu devu izmaiņām. Darba saturu veido 4 nodaļas ar apakšnodaļām. Darba izstrādē izmantoti 76 literatūras avoti, 9 attēli un 2 tabulas. Darba apjoms ir 58 lapaspuses. Bakalaura darbs izstrādāts RSU Augusta Kirhenšteina Mikrobioloģijas un virusoloģijas institūtā.

The aim of this work was to detect high risk human papillomavirus in female renal transplant recipients and evaluate the frequency of HPV infection and viral load changes in the period after transplantation among female renal tranplant recipients. This study included 35 female renal transplant recipients and 79 women with normal cervical cytology. Cervical swabs and periferal blood samples for plasma extraction were used. DNA obtained from cervical swabs both from recipients and control group, were primarly tested with MY09/11 primers, high risk HPV DNA detection and viral load determination was performed with the HPV High Risk Screen Real-TM Quant (Sacace, Italy) kit and HPV typing with the Anyplex™ II HPV28 Detection commercial kit. In addition to HPV DNA detection, high risk HPV L1 antibody presence and HPV 16/18 oncogene expression (only in recipient samples) was determined. Data from both groups was compared and statistical calculations were performed using GraphPad Prism 6. Significantly more samples were HPV DNA positive among the renal allograft recipients – 2 weeks 66 % (23/35), 6 weeks 77 % (27/35) and 1 year after transplantation 69 % (24/35) versus control group 38 % (30/79) (p < 0,05). Similarly, a significantly higher precentage of recipients samples tested positive for high risk HPV DNA too – 2 weeks 31 % (11/35, p < 0,01), 6 months 40 % (14/35, p < 0,0001) and 1 year after transplantation 40 % (14/35, p < 0,0001) versus control group 8 % (6/79). Although highest median viral load was found in samples 1 year after tranplantation, a tendency among the recipient samples could be observed – in most of the samples 6 months after transplantation a rapid increase in viral load was followed with a decrease in the period of 1 year after transplanation. This tendency coincides with the increase of immunosupressive drug dosages 6 months after transplantation. Study has 4 chapters with subdivisions. The totals amount of 76 references, 9 figures and 2 tables were used in this study. This work was done in Rigas Stradins University August Kirhenstein Institute of Microbiology and Virology