Diferenciācijas indukcijas izpēte pēc BRAF un mTOR inhibitoru apstrādes BRAF mutētās ādas melanomas šūnās
Zusammenfassung
Darba mērķis bija padziļināti izpētīt BRAF inhibīcijas un sekojoši kombinētās BRAF un mTOR inhiibīcijas ietkemi uz metastātiskās BRAF mutēās melanomas šūnu līnijas SKMel28 šūnu ciklu, dzīvotspēju un inducēto atgriezensiko epitelilālo diferenciāciju. Ar advancētām mikroskopijas un šūnu analīzes metodēm tika apskatīti šos procesus iespējami ietkmējošie mehānismi. BRAF inhibīcija ar Vemurafenib rezultējās melanomas šūnu epiteliālā diferenciācijā un G1 arestā. Kombinētā BRAF un mTOR inhibīcija šūnās pagarināja šūnu diferencētā fenotipa stadiju, kas norāda uz iespējamu PI3K ceļa iesaisti SKMel28 šūnu augšanas un proliferācijas procesos. Lai arī pēc kombinētās BRAF-mTOR inhibīcijas diferencētais fenotips tika saglabāts ilgāk, SKMel28 šūnas tik un tā atgriezās dediferencētajā stadijā caur uzkrātā p62 mediētu epiteliālo- mezenhimālo tranzīciju. Tika novērotas arī blastulām līdzīgas multinukleāras šūnas, kuras pie apstrādes tikai ar Vemurafenib netika novērotas. Darba mērķis bija padziļināti izpētīt BRAF inhibīcijas un sekojoši kombinētās BRAF un mTOR inhiibīcijas ietkemi uz metastātiskās BRAF mutēās melanomas šūnu līnijas SKMel28 šūnu ciklu, dzīvotspēju un inducēto atgriezensiko epitelilālo diferenciāciju. Ar advancētām mikroskopijas un šūnu analīzes metodēm tika apskatīti šos procesus iespējami ietkmējošie mehānismi. BRAF inhibīcija ar Vemurafenib rezultējās melanomas šūnu epiteliālā diferenciācijā un G1 arestā. Kombinētā BRAF un mTOR inhibīcija šūnās pagarināja šūnu diferencētā fenotipa stadiju, kas norāda uz iespējamu PI3K ceļa iesaisti SKMel28 šūnu augšanas un proliferācijas procesos. Lai arī pēc kombinētās BRAF-mTOR inhibīcijas diferencētais fenotips tika saglabāts ilgāk, SKMel28 šūnas tik un tā atgriezās dediferencētajā stadijā caur uzkrātā p62 mediētu epiteliālo- mezenhimālo tranzīciju. Tika novērotas arī blastulām līdzīgas multinukleāras šūnas, kuras pie apstrādes tikai ar Vemurafenib netika novērotas. The aim was to conduct a study focused on metastatic BRAF mutated melanoma Skmel28 cell line vitality, cell cycle and induced reversible epithelial differentiation after BRAF inhibition and combined BRAF-mTOR inhibiton. With advanced microscopy and cell analysis methods possible underlying mechanisms of said cell processes were looked at. BRAF inhibition with Vemurafenib resulted in melanoma cell epithelial differentiation and G1 arrest. Combined BRAF-mTOR inhibitor treatment prolonged the epithelilal differentiation state. This could possilbly point out PI3K pathway as a contributor to SKMel28 cell growth and proliferation processes. Even though combined BRAF-mTOR inhibitor treatment prolonged the differentiated state it still turned out to be reversible and SKMel28 cells returned to their malignant phenotype through accumulated p62 mediated epithelial to mesenchymal transition. Also blastula-like multinuclear cells, that were not identified with Vemurafenib monotreatment.