Krocīna biosintēzes ceļa ieviešana raugā Rhodotorula toruloides

Abstract

Darba ietvaros ir mēģināts ieviest krocīna biosintēzes ceļu raugā Rhodotorula toruloides. Ir identificētas gēnu, promoteru un terminatoru sekvences, kas ļautu izveidot sintētisku kaseti ievietošanai rauga genomā ar Zelta Vārtu klonēšanas metodi. Ir izdevies apvienot ekspresijai pielāgotos gēnus ar promoteru un terminatoru sekvencēm funkcionālās transkripcijas vienībās, kā arī veikta sekmīga R. toruloides transformācija ar citam rauga celmam veidotu konstruktu, bet plazmīda ar visiem krocīna biosintēzes sasniegšanai nepieciešamajiem gēniem netika iegūta darbā izmantotās klonēšanas protokola mazās efektivitātes dēļ.The aim of the study was to achieve crocin biosynthesis in the yeast Rhodotorula toruloides. Gene, promoter and terminator sequences were identified for the creation of a synthetic construct via the Golden Gate Assembly method for stable integration in the yeast genome. Codon optimized genes were coupled with promoter and terminator sequences in functional transcriptional units and a successful R. toruloides transformation was done with a cassette developed for a different yeast strain as a proof of principle. Plasmid encoding all necessary enzymes for crocin biosynthesis was not created due to the low efficiency of the adapted Golden Gate Assembly protocol used in this work