G genotipa hepatīta B vīrusa HBcAg MIR rajona izmantošana SARS-CoV-2 spike proteīna lineāro neitralizējošo epitopu prezentēšanai. Funkcionāli aktīvu proteīnu izdalīšanas metožu izstrāde

Abstract

Bakalaura darba mērķis bija izstrādāt efektīvāko funkcionāli aktīvu proteīnu izdalīšanas metodi. Tika izmantotas viena, divu un trīs epitopu konstrukcijas, šūnu graušana ar ultraskaņu un FrenchPress, proteīnu attīrīšana precipitējot ar amonija sulfātu, sedimentējot caur saharozes spilvenu, gēlfiltrācijas hromatogrāfija un dialīze, veikta ekstrakcija ar augošas koncentrācijas urīnvielu un imunoloģiskā analīze. Metodes tika novērtētas ar SDS-PAGE, NAGE, EM un DLS. Visefektīvākās metodes: FrenchPress un gēlfiltrācijas hromatogrāfija. Lielākā daļa proteīna un nukleīnskābes tika ekstraģētas 0.5M un 1M urīnvielā. Imunoloģiskā analīze rādīja pozitīvu anti-HBc(G), bet peptīdu atbilde bija nepilnīga.

The aim of the bachelor's thesis was to develop the most efficient method for the isolation of functionally active proteins. One, two, and three epitope constructs, cell disruption by sonication and FrenchPress, protein purification by ammonium sulfate precipitation, sucrose cushion sedimentation, gel filtration chromatography and dialysis, extraction with increasing concentrations of urea, and immunological analysis were used. The methods were evaluated by SDS-PAGE, NAGE, EM and DLS. The most efficient methods: FrenchPress and gel filtration chromatography. Most of the protein and nucleic acid were isolated in 0.5M and 1M urea. The immunoassay was positive for anti-HBc(G), but the peptide response was incomplete.