Hela līnijas šūnu dzīvotspējas noteikšana ar tripānzilā un propīdija jodīda metodi

Abstract

Hela šūnas ir nemirstīga šūnu līnija, kuras tika atklātas pirms pusgadsimta un savu īpašību dēļ vēl joprojām tiek plaši izmantotas dažādos pētījumos. Šī darba mērķis ir apskatīt Hela šūnu dzīvotspējas noteikšanu salīdzinot divu metožu – propīdija jodīda un tripānzilā – efektivitāti. Darbā tika pielietotas sekojošas metodes - šūnu iekrāsošana ar tripānzilo un propīdija jodīdu. Šūnas, kas bija iekrāsotas ar propīdija jodīdu tika analizētas ar plūsmas citometru, bet šūnas, kas bija iekrāsotas ar tripānzilo tika analizētas Gorjajeva kamerā. Papildus tika apgūta šūnu kultivēšanas un tripsinizēšanas metodes. Darba mērķis bija salīdzināt divu metožu efektīgumu analizējot šūnu dzīvotspēju. Iekrāsojot šūnas ar propīdija jodīdu un tās analizējot plūsmas citometrā ieguvām rezultātus, ka propīdija jodīda negatīvās šūnas ir 90,02%, bet pozītīvās 9,95%, un iekrāsojot šūnas ar tripāznilo noteicām, ka dzīvotspējīgās šūnas ir 90,62% un mirušās šūnas – 9,28%. Salīdzinot abu metožu rezultātus, ieguvām, ka abas metodes ir vienlīdz labas, lai noteiktu šūnu dzīvotspēju. Kā arī tika novērtēta šūnu dzīvotspēja pāraugušā šūnu kultūra, rezultātā ieguvām, ka dzīvotspēja ir samazinājusies uz pusi – propīdija negatīvās šūnas ir 58,51%, bet pozitīvās – 41,50%.

Hela cells is immortal cell line, which was discovered half a century ago and due to its properties they are still widely used in various studies. This work aims was to analyze Hela cell viability by comparing the two methods - propidium iodide and trypan blue - efficiency. During the experiment the researcher used the following methods - cell staining with trypan blue and propidium iodide. The cells wich were stained with propidium iodide were analyzed by flow cytometer and cells wich were stained with trypan blue were analyzed in Gorjajev chamber. The aim was to compare the two methods for effective analysis of cell viability. After staining the cells with propidium iodide and analyzing the flow cytometer, we obtained the following results that propidium iodide positive cells are 90.02% viable and stained cells with trypan blue gave 90.62% viability Comparing the results of both methods, we obtained that both methods are equally good for determining cell viability. As well as cell viability was assessed in overgrown cell culture, we obtained the result that the viability is reduced by half – propidium iodide negative cells percentage is 58.51%, but positive - 41.50%.