Hepatīta B vīrusa nukleokapsīdu produkcija zīdītāju šūnās un to īpašību raksturojums

Abstract

Lielākā daļa zināšanu par hepatīta B vīrusa kapsīdas (HBc) proteīnu ir balstītas uz pētījumiem par E.coli šūnās ekspresēto HBc. Zīdītāju šūnās ekspresēta HBc un kapsīdu pētījumi ļautu papildināt esošās zināšanas, kas varētu veicināt tālākus pētījumus un atklājumus. Šī darba ietvaros tika analizēta HBc proteīna ekspresija un lokalizācija CHO šūnās, no CHO šūnām ekspresētās kapsīdas tika attīrītas, noteikts kapsīdu blīvums, noteikta un salīdzināta fosforilācija dažādiem HBc rekombinantajiem analogiem un veikta natīvā elektroforēze kapsīdām. Tika raksturots T=3 un T=4 simetrijas kapsīdu saturs CHO-C6 šūnās ar elektronu mikroskopijas analīzi. Parādīts, ka CHO-C6 šūnās galvenokārt tiek ekspresētas kapsīdas ar blīvumu, kas atbilst tukšām kapsīdām. Kapsīdu nukleīnskābju saturs tika pārbaudīts arī ar natīvas elektroforezes metodi. Atslēgvārdi: HBc, eikariotiskā ekspresija, CHO šūnas

Most of the knowledge about hepatitis B virus capsid (HBc) protein are based on HBc expressed in E.coli cells. These knowledge and future discoveries could benefit from research of HBc and capsids expressed in mammalian cells. In this work HBc production and localization in CHO cells were analyzed, capsids expressed in CHO cells were purified and capsid density was determined, also phosphorylation between different recombinant HBc analogs was determined and compared, capsids were analyzed also by native electrophoresis. The T=3 and T=4 content of CHO-C6 expressed capsids was characterized by electron microscopy. It was shown that most of the capsids expressed in CHO-C6 cells were with density, which corresponds to empty capsids. The nucleic acid content of purified capsids was determined also by the native electrophoresis analysis. Keywords: HBc, eukaryotic expression, CHO cells