Heteroarildihidropirimidīnu ietekmes uz HBV kapsīdu savākšanos pētījumi zīdītāju šūnu kultūrās

Abstract

Tiek lēsts, ka 257 miljoniem cilvēku ir hroniska Hepatīta B vīrusa (HBV) infekcija un līdzšinējā terapija nevar nodrošināt pilnīgu vīrusa izskaušanu. Darbs veltīts jaunu pretvīrusu savienojumu - kapsīdu savākšanās efektoru - atlasei un raksturošanai zīdītāju šūnu kultūrās. Efektīvai HBV kapsīdas sintēzei šūnās izmantoja rekombinanto alfavīrusa replikonu. Ar natīvās agarozes gela elektroforēzi un imunoblotu tika izvērtēta kapsīdu veidošanās šūnās astoņu jauno savienojumu klātbūtnē. Atrasts, ka četri savienojumi -AS-M-II, AS-M-III, V4-93 un V4-84-s, ietekmē kapsīdu savākšanos. Atlasīto vielu antivīrusa efektu tālāk analizēja HBV producējošās HepG2.2.15 šūnās salīdzinot virionu DNS daudzumu barotnē ar reālā laika PĶR. Ir noteiktas savienojumu toksiskā – TC50 un efektīvā – EC50 koncentrācijas. Atlasītā savienojuma - AS-M-III ietekme uz HBV kapsīdu savākšanos un uzkrāšanos šūnās tika pierādīta ar elektronu un imūnfluorescences mikroskopijas metodēm.

It is estimated that 257 million people have a chronic hepatitis B virus infection (HBV) and the current treatment can not ensure complete eradication of the virus. The work was devoted to the selection and characterization of new antiviral compounds - capsid assembly effectors - in mammalian cell cultures. The recombinant alphavirus replicon is used to drive the effective synthesis of HBV capsids in cells. Native agarose electrophoresis and immunoblotting were used to evaluate the formation of capsids in cells in the presence of eight new compounds. The four compounds -AS-M-II, AS-M-III, V4-93 and V4-84-have been found to affect capsid assembly. The antiviral effect of the selected substances was further analyzed in HBV-producing HepG2.2.15 cells by comparing the amount of virion DNA in the medium by the real-time PCR method. The toxic -TC50 and effective – EC50 concentrations of the compounds were determined. The effect of the selected compound, AS-M-III, on the assembly and accumulation of HBV capsids in cells was demonstrated by electron and immunofluorescence microscopy.