Jaunu fluorescējošu krāsvielu novērtējums proteīnu stabilitātes noteikšanai

Abstract

Proteīnu stabilitātes noteikšana ir būtiska bioloģijā, biotehnoloģijā un zāļvielu izstrādē. Diferenciālā skenējošā fluorimetrija (DSF) ir viena no metodēm proteīnu kušanas temperatūras (Tm) noteikšanai, izmantojot fluorescējošas krāsvielas. Šī darba mērķis bija izvērtēt jaunas fluorescējošas krāsvielas, lai uzlabotu DSF metodes jutību un precizitāti. Paraugu sagatavošanai tika iegūti divi modeļproteīni: PKM2 un TARG1. Eksperimentu rezultāti parādīja, ka daļa jauno krāsvielu uzrāda līdzvērtīgu jutību un kušanas temperatūras (Tm) stabilitāti salīdzinājumā ar tradicionāli izmantoto DSF krāsvielu SYPRO Orange.

Protein stability assessment is crucial in biology, biotechnology, and drug development. Differential scanning fluorimetry (DSF) is a method for determining protein melting temperatures (Tm) using fluorescent dyes. The aim of this study was to evaluate novel fluorescent dyes to enhance the sensitivity and accuracy of the DSF method. Two model proteins, PKM2 and TARG1, were obtained for sample preparation. The experimental results showed that some of the new dyes exhibited comparable sensitivity and melting temperature (Tm) stability to the traditionally used DSF dye, SYPRO Orange.