Ādas 3D modeļsistēmas veidošana un raksturošana in vitro

Abstract

Darba mērķis bija izveidot un raksturot in vitro ādas audu modeli, kam pamatā ir ādas šūnu – fibroblastu un keratinocītu kokultūru veidošana un kultivēšana trīsdimensionālā (3D) fibrīna matriksā. Lai sasniegtu mērķi, matriksā tika kultivētas divas dermas šūnu līnijas, kā arī no ādas izdalītu primāro keratinocītu līnija un standartizētu keratinocītu līnija (HaCat). Šūnu kokultūras tika kultivētas divas, trīs un četras nedēļas. Ādas modeļsistēmas raksturošanai tika izmantotas imunohistoķīmijas un ELISA metodes, pēc kurām tika noteikta iegūto ādas audu paraugu morfoloģija un funkcionalitāte. Iegūtie dati norāda uz to, ka izveidotās ādas šūnas audu modeļu testsistēmās ir funkcionālas. Tās producē gan fibroblastu un keratinocītu augšanas faktorus, gan metalloproteināzes. Pēc histoloģiskajām analīzēm tika parādīta šūnu spēja dalīties, augt un pielāgoties 3D fibrīna matriksā.

The aim of this study was to make and characterize a skin tissue model in vitro, which consists of skin cells – fibroblasts and keratinocytes. These co-cultures were made and cultivated in three dimensional (3D) fibrin matrix. To make a skin 3D model system, different dermal and epidermal cell lines were cultivated in fibrin matrix. Two fibroblast cell lines and two epidermal cell lines were used – primary keratinocyte cell line and standardized keratinocyte line (HaCat). Co-cultures were cultivated for two, three and four weeks. Immunochemistry and ELISA methodes were used for the characterization of skin models. Results in this study showed that autologous bioengineered skin tissue is functionally capable of producing fibroblast and keratinocyte growth factors and metalloproteinases. After histological analysis, proliferation, migration and adjustment to 3D fibrin matrix was shown in co-cultured cells.