No bakteriofāga GA atvasināto mozaikālo vīrusiem līdzīgo daļiņu sintēze raugos Saccharomyces cerevisiae

Abstract

Šajā bakalaura darbā ir parādīta no bakteriofāga GA atvasinātu vīrusiem līdzīgo daļiņu (VLD) sintēze raugos Saccharomyces cerevisiae, izmantojot komerciālo plazmīdu pESC-URA. Proteīnu ekspresijas līmenis tika paaugstināts izmantojot raugiem optimālākus aminoskābes kodējošus kodonus. Pēc VLD ieguvuma tika salīdzināta abu plazmīdā esošo promoteru aktivitāte. Izmantojot divus promoterus, tika veikta divu veidu mozaikālo VLD sintēze, kas sastāv no dabiskā GA apvalka proteīna un N-termināli ar HIV-1 Tat sekvenci vai C-termināli ar Rietumnīlas vīrus proteīna E DIII domēna sekvenci pagarināta GA apvalka proteīna. Tika veikta interleikīna-2 mRNS iepakošana no bakteriofāga GA atvasinātās VLD in vivo. Šis darbs izstrādāts Latvijas Biomedicīnas pētījumu un studiju centrā laika posmā no 2010. gada janvāra līdz 2011. gada maijam. Atslēgvārdi: VLD, iepakošana in vivo, HIV-1 Tat, Rietumnīlas vīruss

In this work is shown synthesis of bacteriophage GA derived virus-like particles (VLP) using comercial plasmid pESC-URA in yest Saccharomyces cerevisiae. Level of protein expression was elevated by using aminoacids coding codons, who are more optimal for yeast. The activity of both plasmid promoters was compared by analysing total gain of VLP. By using two promoters was performed a synthesis of VLP, who consisted of natural bacteriophage GA capsid protein and N-terminaly with sequency of HIV-1 Tat or C-terminaly with West Nile virus protein E DIII domain sequency elongated GA capsid protein. There was performed packaging in vivo of interleukin-2 mRNA in VLP’s who were derived from bacteriophage GA. This work was developed in Latvian Biomedical research and study center in period of time from january 2010 till may 2011. Keywords: VLP, packaging in vivo, HIV-1 Tat, West Nile virus