Penicillium lanoso - viride glikoproteīnu preparātu fermentatīvo aktivitāšu raksturojums

Abstract

Darba mērķis bija izpētīt, kādas enzimātiskās aktivitātes piemīt glikoproteīna preparātam, kas izdalīts no Penicillium lanoso-viride mikroskopiskajām sēnēm. Lai sasniegtu mērķi, Escherichia coli celma DH5α kompetentās šūnas tika transformētas ar pUC18 plazmīdu DNS, kultivētas un no tām tika izdalīts superspiralizēts (ccc) plazmīdu DNS. Tika noteiks, kā proteīna preparāts iedarbojas uz superspiralizētu plazmīdu DNS dažādu faktoru ietekmē (EDTA, temperatūra un cinka joni), kā arī uz relaksētu un lineāru plazmīdu DNS. Noskaidrojās, ka glikoproteīna preparātam ir dažādas enzimātiskās aktivitātes – AMP dezamināzes un endonukleāzes, tādēļ tika veikta frakcionēšana uz DEAE celulozes, lai atdalītu proteīnus ar dažādām aktivitātēm. Tika noteiktas endonukleāzes, AMP dezamināzes un fosfatāzes aktivitātes iegūtajās frakcijās, kā arī veikta proteīna preparāta elektroforēze SDS-PAA gēlā. Atslēgvārdi: AMP dezamināze, superspiralizēts plazmīdu DNS, endonukleāze.

In this work a glycoprotein from Penicillium lanoso-viride was studied. The main goal of this study was to find out and characterise enzymatic activities of this protein. For this purpose competent cells of Escherichia coli strain DH5α were transformed with pUC18 plasmid DNA, cultivated and ccc DNA was isolated. Further, the effect of protein on ccc plasmid DNA was studied under certain chemicals and conditions (EDTA, temperature and zinc ions), and the effect of protein on relaxed circular and linear plasmid DNA. It was estabilished that protein has AMP deaminase and endonuclease activities. In order to separate these activities, chromatography on DEAE cellulose was performed. Endonuclease, AMP deaminase and phosphatase activities were determined in eluted fractions, and SDS-PAAG electrophoresis of protein fractions was performed. Keywords: AMP deaminase, supercoiled plasmid DNA, endonuclease.