Transfekcijas efektivitāte HeLa, SKOV-3 un HPAF-II šūnu populācijās pēc to apstrādes ar UV starojumu

Abstract

Darba mērķis bija noteikt transfekcijas efektivitāti HeLa, SKOV-3 un HPAF-II šūnu populācijās pēc to apstrādes ar UV starojumu. Pētījumā izmantotās šūnu kultūras tika apstarotas ar UV gaismu 90 min., pēc apstarošanas bija 24 un 48 stundu ilgs kontakts ar plazmīdu pGFP-N3, un līdz ar to tās tika kultivētas 24 un 48 stundas. Izmantojot fluorescences mikroskopiju, tika noteikta transfekcijas efektivitāte. Savstarpēji tika analizēts GFP ekspresējošo šūnu daudzums un ar DAPI krāsoto šūnu daudzums, kā arī procentuālais GFP ekspresējošo mikrošūnu daudzums un ar DAPI krāsoto mikrošūnu daudzums. Tika noteikts, ka visefektīvāk transfekcija noris, ja šūnas kultivē 24 stundas. Darbs izstrādāts Latvijas Biomedicīnas pētījumu un studiju centrā no 2012.gada septembra līdz 2013. gada aprīlim.

Atslēgvārdi: HeLa, SKOV-3, HPAF-II, GFP, transfekcija, UV starojums.

Aim of the study was to determine the transfection efficiency in HeLa, SKOV-3 and HPAF-II cell populations after treatment with UV radiation. In the study used cell cultures were treated with UV light for 90 minutes, after irradiation cells had 24 and 48 hours long contact time with the plasmid pGFP-N3, as follows, cells were cultured for 24 and 48 hours. Transfection efficiency was monitored using fluorescence microscopy. Mutually GFP expressing cells and with DAPI stained cells were analyzed, as well as the percentage of GFP expressing microcells amount and with DAPI stained microcells count were evaluated. It was established that the most efficient transfection occurs when the cells were cultured for 24 hours. Study was done at the Latvian Biomedical Research and Study Centre from September 2012 to April 2013.

Keywords: HeLa, SKOV-3, HPAF-II, GFP, transfection, UV radiation.