Augu vīrusa RGMoV nestrukturālo proteīnu raksturošanas pētījumi

Abstract

Darba mērķis ir veikt funkcionālu un strukturālu RGMoV nestrukturālo proteīnu raksturojumu, izmantojot E.coli ekspresijas sistēmu rekombinantu proteīnu iegūšanai. Darba gaitā tika izveidotas vairākas E.coli ekspresijas plazmīdu konstrukcijas, kas satur RGMoV nestrukturālos proteīnus kodējošus gēnus – RdRP, P1, SerP-VPg un P10. Iegūtas poliklonālās peļu antivielas pret sajūgto proteīnu Rbx-P1. Iegūti preparatīvos daudzumos, šķīstošā formā rekombinanti SerP-VPg un P10, tiem veikti kristalizācijas eksperimenti, kuros noskaidroti P10 kristalizācijas apstākļi. Veikta ATFāzes aktivitātes noteikšana rekombinantajiem P10, P16. Darbs izstrādāts Latvijas Biomedicīnas pētījumu un studiju centrā Rekombinanto proteīnu laboratorijā Dr.biol. Andra Zeltiņa, Dr.biol. Inas Baļķes vadībā, laika posmā laika posmā 2011.10.-2013.05. Atslēgas vārdi: nestrukturālie RGMoV proteīni, proteīnu funkcionāls un strukturāls raksturojums, Sobemovirus, kristalogrāfija, E.coli ekspresijas sistēma.

The aim of this work is to carry out functional and structural studies on Ryegrass mottle virus non-structural proteins, using bacterial E.coli expression systems to obtain the recombinant proteins. In the course of the work several E.coli expression plasmids containing RGMoV non-structural protein genes were constructed – RdRP, P1, SerP-VPg and P10. Polyclonal Anti-Rbx-P1 antibodies were obtained. Crystallisation experiments were performed on SerP-VPg and P10. Crystallisation conditions for P10 protein were obtained and ATPase activity was performed on recombinant P10 and P16. The Master’s thesis was carried out at the Latvian Biomedical Research and Study center from September 2011 till May 2013 under the supervision of Dr.biol. Andris Zeltins and Dr.biol. Ina Balke. Key words: RGMoV non-structural proteins, protein structural and functional characterization, Sobemovirus, crystallography, E.coli expression systems.