Kolorektālā audzēja šūnu līniju SW480 un SW620 ekstracelulāro vezikulu endocitozes ceļa noskaidrošana monocītu šūnu līnijā THP-1

Abstract

Vēža šūnu izdalītās ekstracelulārās vezikulas tiek uzskatītas par vienu no audzēju mikrovides starpšūnu komunikācijas līdzekļiem, kā arī metastātiskās nišas veidošanās iniciatoriem. Makrofāgi ir būtiska audzēja mikrovides sastāvdaļa, tāpēc darba mērķis bija noteikt audzēja šūnu izdalīto ekstracelulāro vezikulu endocitozes ceļu monocītu šūnu līnijā THP-1. Kolorektālā audzēja šūnu līniju SW480 un SW620 normoksijas un hipoksijas apstākļos izdalītās ekstracelulārās vezikulas iezīmēja ar fluorescento krāsvielu Syto RNASelect un noteica to uzņemšana THP-1 šūnās ar plūsmas citometrijas metodi. Izmantojot klatrīna, kaveolīna/lipīdu mikrodomēnu, fagocitozes un makropinocitozes inhibitorus, normoksijas apstākļos izdalītajām SW480 un SW620 EV noteica endocitozes ceļu THP-1 šūnās. Rezultātus aprēķināja datu apstrādes programmā ExpresPro un noteica endocitozes inhibitoru efektu uz iezīmēto EV uzņemšanu THP-1 šūnās. Galvenais endocitozes ceļš monocītu šūnu līnijā THP-1 ir kaveolīna atkarīgā endocitoze.

Extracellular vesicles that are released by tumour cells are known to participate in cell-to-cell communication in tumour microenvironment and to be one of the initiators of metastatic niche development. Macrophages play a significant role in cancer niche therefore the aim of the work was to determine the endocytic pathway of cancer cell released extracellular vesicles in monocyte cell line THP-1 cells. The uptake of Syto RNASelect labelled colorectal cancer cell line SW480 and SW620 cell normoxia or hypoxia secreted extracellular vesicles in THP-1 cells was analysed by flow cytometry. Using clathrin, caveolin/lipid raft, phagocytosis and macropinocytosis inhibitors, the endocytic pathway was determined for normoxic SW480 and SW620 EVs. The results showed that the main endocytic pathway for normoxic SW480 and SW620 EV in monocyte cell line THP-1 is caveolae-mediated endocytosis.