Bromoviridae dzimtas augu vīrusu apvalka proteīnu N-terminālo daļu īpašību pētījumi

Abstract

Bakalaura darba mērķis ir pārbaudīt ekspresēto un attīrīto ApMV un CMV CP N-gala sajūgtos domēnus ar eGFP dimerizācijas-oligomerizācijas īpašības, kas varētu turpmāk tikt izmantotas imunizācijas eksperimentiem. Darba gaitā tika izveidotas trīs konstrukcijas, kur CP N-terminālie domēni tika ģenētiski savienoti ar eGFP modeļproteīnu un sešu histidīnu atkārtojumiem sajūgto proteīnu attīrīšanai. Sajūgtie proteīni tika noekspresēti un, attīrīti ar afīno hromatogrāfiju. Nukleīnskābes kustīguma nobīdes eksperimenti parādīja, ka ar Zn2+ audzētam nApMV-eGFP ir augstāka afinitāte pret CP mRNS un PCR, nekā audzētam bez Zn2+. Visām N-gala proteīniem ir augstāka afinitāte pret CP mRNS nekā pret CP PCR. DLS analīzē tika noskaidrots, ka visas konstrukcijas veido oligomērus mRNS klātbūtnē.

The aim of this bachelor work is to test dimerization-oligomerization qualities of expressed and purified ApMV and CMV CP N-terminal domains fused with eGFP, which could be used in immunization experiments in future. Three constructions were made, where CP N-terminal domains were genetically fused with eGFP model protein and six histidine residues for purification of fusion proteins. Himeric proteins were expressed and purified with affine chromatography. Electrophoretic mobility shift assay showed that with Zn2+ cultivated nApMV-eGFP has stronger affinity to CP mRNA and PCR, than nApMV-eGFP cultivated without Zn2+. All N-terminal proteins have stronger affinity to CP mRNA, that to CP PCR. Dynamic light scattering analysis indicated that all constructions form oligomers in the presence of mRNA.