Hepatīta B vīrusa G genotipa serdes antigēna veidoto vīrusveidīgo daļiņu raksturošana

Abstract

Šajā darbā tika salīdzinātas divas metodes HBV serdes antigēna veidoto vīrusveidīgo daļiņu (VVD) attīrīšanai no iepakotajām nukleīnskābēm – metode kapsīdu disociācijai ar GuHCl un sārmu hidrolīzes metode. Darbā aprakstīti un analizēti abu attīrīšanas metožu posmi un izdarīti secinājumi par attiecīgo attīrīšanas metožu efektivitāti. Tāpat tika raksturotas ar abām attīrīšanas metodēm iegūtās HBV G genotipa serdes antigēna VVD, nosakot to morfoloģiju (elektronu mikroskopija, dinamiskā gaismas izkliede) un spēju pakot raksturotas funkcionālas nukleīnskābes – CpG oligonukleotīdus, bakteriofāga dsRNS un DTxA mRNS. Eksperimentu rezultāti parāda, ka ar abām attīrīšanas metodēm iegūtās tukšās VVD spēj pakot nukleīnskābes. Ar sārmu hidrolīzi attīrīto VVD diametrs ir lielāks, kā ar GuHCl attīrīto VVD. Attīrīšanas metožu analīze parāda augstāku proteīna iznākumu attīrot disociācijā ar GuHCl, bet sārmu hidrolīzes metode ir viegli pārveidojama un uzlabojama.

In this paper, two methods for HBV core antigen virus-like particle (VLP) purification from encapsidated nucleic acids were compared – method for capsid dissociation with GuHCl and alkaline treatment. For both methods steps of purification were discribed, analyzed and conclusions were made about efficiency of these methods. In both purification methods HBV genotype G core antigen VLPs were acquired and characterized by determining their morphology (electron microscopy, dynamic light scattering) and ability to package characterized and functional nucleic acids – CpG oligonucleotides, phage dsRNA and DTxA mRNA. Results of these experiments show, that with both purification methods acquired VLPs are able to package nucleic acids. VLPs purified by alkaline treatment were larger in diameter than those purified by GuHCl method. Analysis of purification methods also show higher protein outcome by dissociation with GuHCl, but alkaline treatment appeared to be relativly easy to modify and improve.