Bromoviridae dzimtas augu vīrusa nanodaļiņu konstruēšana un raksturošana

Abstract

Bakalaura darba mērķis bija iegūt VLP E.coli no pilna un par 24 aa N-gala saīsināta CCMV CP VLP un balstoties uz šīm konstrukcijām, izveidot CP konstrukcijas, kas N- vai C- galā satur TT830 peptīda sekvenci. Bakalaura darbs izstrādāts no 2015. gada septembra līdz 2016. gada maijam Latvijas Biomedicīnas pētījumu un studiju centrā, Augu virusoloģijas laboratorijā Dr. biol. Andra Zeltiņa un Dr. biol. Inas Baļķes vadībā. Pētījumu objekts ir lopbarības pupiņas raibumu vīruss - CCMV. Bakalaura darba laikā tika izveidotas piecas CCMV CP ekspresijas konstrukcijas - pET42-CCMV, pET42-CCMV–Ntt830, pET42-CCMV–Ctt830, pET42-Δ24CCMV, pET42-Δ24CCMV-Ntt830 un pET42-Δ24CCMV–Ctt830. Ekspresijas pārbaudes analīze uzrādīja, ka visi CP varianti ekspresējas E.coli un ir šķīstoši, kā arī veido VLP. CCMV, Δ24CCMV, CCMV-Ntt830 un Δ24CCMV-Ntt830 veido T=3 simetrijas daļiņas, bet CCMV-Ctt830 un Δ24CCMV-Ctt830 veido bacilformas vai pleomorfas daļiņas. CCMV, Δ24CCMV, CCMV-Ntt830 un Δ24CCMV-Ntt830 var izmantot ķīmiskai epitopu pievienošanai. Atslēgas vārdi: lopbarības pupiņas raibumu vīruss, apvalka proteīns, tetanusa toksīns, VLP

The aim of my bachelor work was to make VLP in E.coli from complete and N-terminal 24 aa deletion mutant of the CP protein, and make constructions with TT830 epitope in CP N- and C- terminus. My research has been worked out from September 2015 to May 2016 at Plant Virology group at Latvian Biomedical Research and Study Centre under supervison of Dr. biol. Andris Zeltiņš and Dr. biol. Ina Baļķe. The object of my research was cowpea chlorotic mottle virus – CCMV. Five CCMV CP expression constuction was made during my bachelor work - pET42-CCMV, pET42-CCMV-Ntt830, pET42-CCMV-Ctt830, pET42-Δ24CCMV, pET42-Δ24CCMV-Ntt830 and pET42-Δ24CCMV-Ctt830. Expression analysis revealed that all CP constructs were soluble and expressed in E.coli, also making VLP. CCMV, Δ24CCMV, CCMV-Ntt830 and Δ24CCMV-Ntt830 have T=3 symmetry, but CCMV-Ctt830 and Δ24CCMV-Ctt830 have extended and pleomorphic particles. CCMV, Δ24CCMV, CCMV-Ntt830 and Δ24CCMV-Ntt830 can be used for coupling reactions. Key words: cowpea chlorotic mottle virus, coat protein, tetanus toxin, VLP.