Penicillium lanoso-viride AMP dezamināzes imunomodulatoro mehānismu izpēte dažādās imūno šūnu subpopulacijās

Abstract

Maģistra darbā tika pētīti P.lanoso-viride AMPD imunomodulatorie mehānismi. Lai identificētu imūnās sistēmas šūnu populācijas un PRR klāstu, kas atbildīgi par AMPD atpazīšanu, ex vivo tika stimulēti perifēro asiņu paraugi ar AMPD (10 μg/ml), LPS (1 μg/ml) un Lentinānu (10 μg/ml) 4h vai 24 h. Tika veikta monocītu subopoulāciju fenotipēšana un aktivācijas marķieru (CD16, HLA-DR) virsmas un gēnu ekspresijas analīze, iekaisuma citokīnu (TNFα, IL-8, IL-6, IL-1b, MIP-1a, MIP-1b) sekrēcijas analīze. Tika veikta MR, TLR2, TLR4 un Dectin1 receptoru bloķēšana perifēro asiņu mononukleārajās šūnās. Rezultāti liecina, ka AMPD darbības mehānisma pamatā ir saistīšanās ar TLR4 receptoru, kura aktivācija ierosina iekaisuma citokīnu produkcijas pieaugumu un izraisa monocītu fenotipiskas izmaiņas neklasisko monocītu subpopulācijas virzienā, un pastiprinātu HLA-DR ekspresiju. Kopējā AMPD imūnstimulējošā darbība ir izteiktāka kā lentinānam, un mazāka kā LPS izraisītajam efektam.

The aim of this research was to unfold immunomodulatory mechanisms of P.lanoso-viride AMPD in immune cell populations. Evaluation of AMPD effects in human whole blood samples was done to find immune cell populations and PRR responsible for AMPD detection and related changes in immune response. Whole blood samples were used for stimulation with AMPD (10 μg/ml), LPS (1 μg/ml), Lentinan (10 μg/ml) for 4h or 24h. Phenotyping of monocyte subpopulations, activation marker (CD16, HLA-DR) surface and gene expression and analysis of inflamatory cytokine secreation was performed. Neutralization of MR, TLR2, TLR4, and Dectin1 receptors was carried out on PBMCs. Results show that stimulation with AMPD increases the secretion of proinflammatory cytokines through binding to TLR4 receptor, induce monocyte phenotype switching to non-classical subtype, and increase HLA-DR expression. The tested concentrations of AMPD showed more notable stimulatory effect than Lentinan and less notable than LPS.