Uz Borrelia burgdorferi konservatīviem ārējās virsmas proteīniem un ssRNS bakteriofāgu vīrusveidīgo daļiņu platformas balstīta vakcīnas prototipa izstrāde pret Laimas slimību
Автор
Kozlova, Anna
Co-author
Latvijas Universitāte. Bioloģijas fakultāte
Advisor
Liekniņa, Ilva
Дата
2023Metadata
Показать полную информациюАннотации
Darba mērķis bija izveidot vakcīnas prototipu pret Laimas slimību, piesaistot hromosomāli kodētus Borrelia burgdorferi ārējās virsmas proteīnus pie ssRNS fāga Qb VLP, un pārbaudīt izveidotā vakcīnas prototipa imunogenitāti un iegūto antivielu baktericiditāti. Mērķa sasniegšanai veikta sekmīga B. burgdorferi proteīnu BB0028, BB0158 un BB0689 producēšana E. coli šūnās, attīrīšana ar metālafinitātes hromatogrāfiju un ķīmiska konjugēšana pie fāga Qb VLP. BB0028, BB0158, BB0689 proteīnu un VLP-proteīnu konjugātu imunogenitāte pārbaudīta peļu modelī, iegūtās antivielu titru vērtības statistiski būtiski neatšķīrās starp imunizācijas grupām. Pelēm pēc imunizācijas izveidojās antivielas gan pret B. burgdorferi proteīniem, gan Qb VLP. Peļu seruma antivielām netika konstatēta baktericīda ietekme uz B. burgdorferi. Antivielu piesaistīšanās pie attīrītiem BB0028, BB0158, BB0689 un atbilstošajiem proteīniem B. burgdorferi lizātā apstiprināta ar Western Blot, tika konstatētas atšķirības proteīnu ekspresijas līmeņos. The aim of the work was to develop a vaccine prototype against Lyme disease by conjugating chromosomally encoded Borrelia burgdorferi outer-surface proteins to the VLP of Qb ssRNA phage, to test the immunogenicity of the created vaccine prototype, and bactericidal effect of the obtained antibodies. To achieve the aim B. burgdorferi proteins BB0028, BB0158 and BB0689 were produced in E. coli cells, purified by immobilized metal affinity chromatography, and chemically conjugated to the VLP of Qb phage. The immunogenicity of BB0028, BB0158, BB0689 and VLP-protein conjugates was tested in mouse model, the differences in resulting values of antibody titers were not statistically significant between immunization groups. Mice developed antibodies against both B. burgdorferi proteins and Qb VLP after immunization. No bactericidal effects of obtained antibodies were observed on B. burgdorferi. Antibody binding to purified BB0028, BB0158, BB0689 and to corresponding proteins in B. burgdorferi lysate was confirmed by Western Blot, differences in protein expression levels were found.