In vitro modeļa izveide ļaundabīgā audzēja ekstracelulāro vezīkulu endocitozes pētīšanai mezenhimālajās šūnās

Abstract

Ekstracelulārās vezīkulas (EV) pārnes dažādas funkcionālas molekulas, nodrošinot informācijas pārnesi starp šūnām un ierosinot dažādus patoloģiskus procesus. Cilvēka mezenhimālās cilmes šūnas (MCŠ) ir vienas no audzēju stromas komponentēm, kas veicina audzēja augšanu un angioģenēzi. Darba mērķis bija noskaidrot, vai ādas MCŠ uzņem normoksijā un hipoksijā kultivētu kolorektālā audzēja šūnu līniju SW620 un SW480 EV, un izpētīt iespējamo endocitozes ceļu. Lai to noskaidrotu, tika izveidots in vitro modelis audzēja EV uzņemšanas pētījumiem MCŠ un noteiktas optimālās endocitozes inhibitoru koncentrācijas. Pētījuma rezultāti parāda, ka optimālā endocitozes inhibitoru citohalazīna-D un hlorpromazīna koncentrācija ir 40 M, EIPA 20 M, nistatīna un dainasora 80 M. Kolorektālā audzēja SW480N EV uzņemtas 99,7%, SW480H EV - 91,5%, SW620N EV – 40,6%, SW620H EV – 95,4% MCŠ.

Extracellular vesicles (EV) carry functional molecules that participates in transferring information between cells and thus may mediate many pathological processes. Human mesenchymal stem cells (MSCs) are one of stromal cells in solid tumours and their function is to promote tumour growth and angiogenesis. The aim of this study was to investigate cancer cell line EV uptake by human MSCs and to explore possible endocytosis pathway. Therefore, we made in vitro model of cancer research EV uptake in dermal MSCs. Additionally, optimal concentration of endocytosis inhibitors were determined in MSC cultures. The results show that the optimal concentration of endocytosis inhibitors cytohalazin-D and chlorpromazin is 40 M, EIPA 20 M, nystatin and dainasor 80 M. EV derived from colorectal cancer cells was taken up in dermal MSC in the following amounts: SW480N - 99,7%, SW480H - 91,5%, SW620N – 40,6%, SW620H – 95,4%.