Taukaudu mezenhimālo stromālo šūnu iegūšana un raksturošana no SigmaR1 -/- pelēm

Abstract

Maģistra darba mērķis bija veikt mezenhimālo cilmes (stromālo) šūnu (MCŠ) izdalīšanu no Sigma-1 receptora (SigmaR1) inaktivētā gēna peļu taukaudiem un noteikt to adipodiferenciācijas potenciālu. Šūnu fenotips tika raksturots, nosakot marķieru ekspresiju ar plūsmas citometriju, savukārt izdalīto šūnu adipodiferenciācija tika noteikta ar attēlu metodi un Oil-Red-O ekstrakciju. Fenotipēšana parādīja, ka lielākā daļa šūnu pieder pie MCŠ, ekspresējot CD29, CD44 un SCA-1 virsmas marķierus virs 90 % populācijas līmenī un daļēji ekspresējot CD105. Adipodiferenciācija uzrādīja statistiski ticamu atšķirību starp kontroles un SigmaR1 inaktivētā gēna (SigmaR1 -/-) grupu, izmantojot Oil-Red-O ekstrakcijas metodi, no kā var secināt, ka inaktivētā gēna šūnām ir samazināta spēja diferencēties par adipocītiem.

The aim of the master's thesis was to isolate mesenchymal stromal cells (MSCs) from mouse adipose tissue of Sigma-1 receptor (SigmaR1) knock-out mice and determine their adipodifferentiation potential. Cell phenotype was characterised by determining the expression of markers using flow cytometry while adipodifferentiation of isolated cells was evaluated by imaging method and Oil-Red-O extraction. Phenotyping showed that most cells belonged to MSCs, expressing CD29, CD44 and SCA-1 surface markers above 90% on a population-level and partially expressing CD105. Adipodifferentiation showed a statistically significant difference between the control and SigmaR1 knock-out (SigmaR1 -/-) group using Oil-Red-O extraction method, thus it can be concluded that knock-out cells display weaker ability to differentiate towards adipocytes.